常规的质粒抽提试剂盒并不适用于BAC/PAC/P1等大型质粒DNA的抽提。这主要是因为大型质粒DNA分子量很大,常常会 超过100kb。使用常规的抽提试剂盒不但产量低而且会打断这些大分子量的质粒DNA。该试剂盒将采用**碱裂解法和硅胶 柱纯化技术,硅胶柱在独特的结合缓冲液中能**地回收大片段质粒DNA的同时,减少质粒断裂的可能性。
大提试剂盒适合于从50-250ml细菌培养液中纯化大分子量的质粒载体,或各种BAC,PAC,粘粒,Cosmid等载体。 纯化的质粒可直接用于大片段测序,酶切,PCR,文库制备等应用。细菌收集后,加入Buffer T1/T2裂解,再加入Buffer T3离心沉淀去除蛋白质和染色体DNA,在得到的上清液中加入独特的结合液并转移至结合柱进一步去除蛋白质,经过简单的两次洗涤即可得到高纯度的BAC/PAC/P1等大片段质粒DNA。