钙离子探针

原理及应用介绍

钙成像技术（calcium imaging）是指利用钙离子指示剂监测组织细胞内钙离子浓度的方法。神经元钙成像技术的原理就是借助钙离子浓度与神经元活动之间的严格对应关系，利用特殊的荧光染料或者蛋白质荧光探针（钙离子指示剂，calcium indicator），将神经元中的钙离子浓度通过荧光强度表现出来，从而达到监测神经元活动的目的。

实施方法

Step1：选择合适的钙离子指示剂。

Step2：将钙离子指示剂转运至目标部位。

化学荧光指示剂通常采用电极刺穿或借助乙酰氧基甲酯和右旋葡萄糖的方式进入到目标部位，而GECI指示剂则主要借助于病毒感染的方式导入至目标部位。

Step3：收集信号，记录结果。

钙离子荧光信号的检测一般有多种选择，如多通道在体电生理，可记录多脑区，并精确到单个神经元；双光子成像动物必须头部固定，可记录单个神经元，更可观察到皮层神经元亚细胞结构轴突末端的钙信号；光纤记录无细胞分辨率，记录不同脑区的群体神经元活动（仅限光纤探针尖端附近）；微型显微镜（单光子成像），可长时间记录群体神经元，透镜植入会引起组织损伤，某些行为学实验不适用（水迷宫、强迫游泳）。不同的方式各有优劣势，需根据具体的实验条件和需求选择。

图1.钙离子成像光纤记录示意图

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GCaMP蛋白，由cpGFP蛋白、CaM（calmodulin钙调蛋白）、M13肽这三个结构组成，当有钙离子存在时，CaM和M13结合，连带引起cpGFP蛋白的构象，增强荧光信号。在实验中用于指示细胞中的Ca信号活动，又被称为GeCI(genetically encoded calcium indicator)。

GCaMP6 GCaMP6(495 nm).

GCaMP6s slow光强最强，更晚淬灭（低频最敏感）

GCaMP6m medium光强和淬灭中等（中等）

GCaMP6f fast光强较弱，更快淬灭（高频）

GCaMP6是新一代的GCaMP蛋白，它的钙指示功能达到甚至超过了常用的化学钙指示剂。它有三种常用的亚型，6s，6f和6m，其中对于钙离子的结合力，6s>6m>6f，所以6s最敏感，适合低频信号的指示，6f解离最快，适合高频信号的指示，6m结合活性适中，适用的范围最广。GcaMP6是一种超灵敏的荧光蛋白，可以特异高效地反映细胞内游离Ca2+浓度的变化，在活体下，对单个动作电位诱发的钙信号，GCaMP6比GCaMP3强10倍，动力学快2倍。

包装：瓶装

供应商：西安齐岳生物科技

产地：西安

温馨提示:本产品仅用于科研实验