6-FAM叠氮化物是通过与炔基反应开发荧光生物共轭物的良好试剂。 6-FAM是羧基荧光素的纯化单一异构体

标记寡核苷酸

1.准备以下试剂：

200mMTHPTA [tris（3-羟丙基三唑基甲基）胺]水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃修饰的低聚水溶液（尽可能浓缩，例如>10 mg / mL）

100mM抗坏血酸钠水溶液

10mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）

2.在反应前将CuSO4与THPTA以1：2的比例混合并充分涡旋几分钟。该溶液在冷冻时可稳定数周。

3.向炔烃改性的低聚物溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为2-5当量）。

4.加入5当量的THPTA / CuSO4工作溶液（来自步骤1）。

5.加入10-30当量的抗坏血酸钠。

6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。

7.通过所需的方法（例如HPLC）沉淀或纯化乙醇。

标记肽

1.准备以下试剂：

200mM THPTA配体水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃修饰肽水溶液或DMF溶液（取决于您的肽溶解度，>10 mg / mL）

100 mM抗坏血酸钠水溶液

10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）

2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。

3.向炔烃修饰的肽溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为5-10当量）。

4.加入5-10当量的THPTA / CuSO4。

5.加入10-20当量的抗坏血酸钠。

6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。

7.通过HPLC纯化您想要的肽。

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