齐岳生物--外泌体制备技术及其储存方式详解

西安齐岳生物科技有限公司是集化学科研和定制与一体的高科技化学公司。业务范围包括化学试剂和产品的研发、生产、销售等。涉 及产品为通用试剂的分销、非通用试剂的定制与研发，涵盖生物科技、精细化学品、医药中间体和化工材料等领域。

外泌体制备技术指南：

一、贴壁/悬浮细胞（收集细胞上清，除去细胞或细胞碎片）

（1）贴壁细胞培养诱导结束后，去除培养液;

（2）加入适量的PBS缓冲液冲洗-次,彻底去除FBS;

（3）按每10cm皿(约107细胞) 10m|培养基,换外泌体专用无血清培养基培养至少48hr (细胞融合率

至少70%以上) ;

（4）48hr后，收集细胞上清，并于3000x g离心15min,去除细胞或细胞碎片;

（5）放入-80°C冰箱中保存。

二、提前做好血清或者血浆的分离

（1）全血:通过采血管采集后，经过抗凝处理的全部血液。

（2）血浆:经过抗凝处理的全血，进行低速离心后的上清液，为淡黄色液体。

（3）血清:不经过抗凝处理的血液，让它自行凝固，在进行低速离心后的上清液，为淡黄色液体。

不同样本提取的外泌体比照图：

血浆样本图         血浆提取后的外泌体

全血样本-已溶血状态       溶血后提取的外泌体

具体全血样本操作如下:

三、组织液（尿液、脑脊液、外泌体）收集处理

尿液：

（1）收集尿液时，应该尽量选择受试者的“新鲜”尿液20ml,并注意避免细菌污染,收集前注意对饮食的控制;

（2）并于3000x g离心15min,去除细胞或细胞碎片; .

（3） -80°C冰箱中保存;

（4）填写样本登记单,记录样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处理过程等情况。

脑脊液：

（1）收集集脑脊液10ml,避免受到血液污染;

（2）并于3000xg离心15min,去除细胞或细胞碎片;

（3）-80°C冰箱中保存;

（4）填写样本登记单,记录样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处理过程等情况。

外泌体：

（1）收集细胞上清或组织液10ml (血清1ml)，抽提外泌体后，用100μL- 500μLBuffer重悬沉淀(所用buffer根据下游的蛋白分析则用蛋白裂解液，RNA分析则TriZo|裂解) ;

（2）检测浓度,蛋白浓度2 1ug/ul, RNA浓度250ng/ul;

（3）放入-80°C冰箱中保存。

包装注意事项：

1.在包裹样本的铝箔或冷冻保存管表面，用油性记号笔标明样本编号及样本类型。避免被乙醇等有机溶剂抹掉。

2.请用铝箔或冷冻保存管包裹样本后再装入样本袋中，避免使用纱布、纸张直接包裹样本。

3.标签纸请贴于样本袋绳上，避免贴于容器表面导致脱落造成样本混乱。

储存注意事项：

1.样本采集后,样本迅速放入进口**冻存管中，拧紧后立即到-80°C中保存。

2.细胞上清样本处理后储存于-80°C冰箱中。在20°C冰箱中储存不宜太久。

3.血液样本建议使用PAXgene管(BD) 保存。

4. RNA/蛋白样本储存于-80°C冰箱中。

运输方式：干冰与冰袋运输。

齐岳生物供应产品：

温馨提示：西安齐岳生物供应产品仅用于科研，不能用于人体。