将特异性抗体与荧光色素通过化学方法结合起来，即可得到荧光抗体。这种荧光抗体与相应的抗原结合，形成抗体-抗原复合物，再通过特定的仪器检测荧光，从而对抗原抗体进行示踪检测。目前，荧光抗体因其高灵敏度、高特异性、易操作性被广泛用于流式细胞仪、酶联免疫吸附、蛋白印记、原位杂交、荧光成像等检测中。

荧光素：能够产生明显荧光并能作为染料使用的有机化合物称为荧光素或荧光染料。适用于标记蛋白的荧光色素主要有异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC），四乙基罗达明（rho-damine B200，RB200）和四甲基异硫氰基罗达明(tetramethyl rhodamine isotheynate，TMRITC)。实际上目前应用比较多的只有异硫氰酸荧光素一种。

下面我们就以异硫氰酸荧光素(FITC)为例，简要介绍一下抗体的荧光素标记方法。

许多蛋白质表面含有较多的赖氨酸残基，这些赖氨酸残基的游离ε-氨基可与FITC共价结合。与FITC结合的抗体可用为特异性的探针，以测定细胞相应抗原的存在。FITC具有很高的量子产量（发射光与吸收光的比值为0 .85），而且形成的偶联物的稳定性很好，FITC是目前应用比较广的荧光染料。在pH 9.8条件下，赖氨酸残基的游离ε-氨基与FITC发生的亲核反应，由此形成硫脲连接。

异硫氰酸荧光素常用的标记法有以下两种：

1）搅拌法(适合大样品)

• 取一定量的纯化后的IgG溶液，用0.5 mol/L pH9.8碳酸盐缓冲液稀释至20 mg/mL。

• 按荧光素与抗体比1︰20~1︰100(一般用1︰100)称取异硫氰酸荧光素，用pH9.8碳酸盐缓冲液溶解。

• 将IgG溶液置于电磁搅拌器上，启动开关，轻轻搅拌，以不起沫为准。逐滴加入荧光素液(约10min~15min加完)。实验过程中，随时测定搅拌液的pH值，若低于9.0，则应以碳酸钠溶液调整。置4 ℃搅拌6 h～12 h即可。

2）透析法（适合小样品）

• IgG溶液用0.5 mol/L pH9.8碳酸盐缓冲液稀释成1%浓度，装入透析袋中。

• 将荧光素配成0.1 mg/mL，其量为1%抗体溶液的10倍，装入烧杯中。

• 将透析袋置于烧杯中，放电磁搅拌器上4 ℃搅拌24即可。

透析法的优点是标记均匀，非特异性荧光少，但所标记的时间长，荧光素的用量多，约比搅拌法多10倍。

西安齐岳生物提供异硫氰酸荧光素（FITC）标记抗体Anti-FITC Antibodies

• 单克隆抗体

• 多克隆抗体

• 重组抗体

• 结合抗体

• 非结合抗体

• 特异性抗体

• 细胞凋亡相关抗体

• 细胞器定位相关抗体

• 信号通路重要蛋白相关抗体

• FITC标记的鼠李糖抗体

• FITC标记的抗体可以检测细胞，组织切片和蛋白质印迹中的抗原