NHS-Biotin是常用的胺反应性生物素衍生物，用于修饰蛋白质和其他生物分子。 这种伯胺偶联剂已成功用于体内选择性标记大肠杆菌细胞包膜蛋白。 它先标记外膜、周质和内膜蛋白以及特定的内膜标记蛋白 (Tet-LacZ)。

反应原理

已知生物素与抗生物素蛋白牢固结合，其特性已广泛用于高灵敏度分析。由于生物素与抗生物素蛋白之间的结合稳定性常数为1015，比抗原-抗体反应高3至4个数量级，因此一旦结合至抗生物素蛋白的生物素在生理条件下不会脱落。

另外，生物素是具有羧基的小分子，可以容易地化学修饰，并且可以在不损害蛋白质等的活性的情况下进行标记。

因此，已经开发出许多生物素化合物作为使用抗体进行免疫测定的标记剂。

具有活性酯基的生物素通常用于与蛋白质的氨基（NH2）结合，具有马来酰亚胺基的生物素用于巯基（SH）。

蛋白质的生物素标记操作方法

1) 用10mmol/l Bicine Buffer (pH8.5) 溶解蛋白质，制成蛋白质溶液。

2) 在蛋白质溶液中加入配制好的生物素标记试剂溶液，蛋白质：生物素标记试剂的混合摩尔比为1:2-1:10。

3) 充分混合后，在水浴恒温摇床 (25 ℃) 中培养2-4 h。