活性氧的测定方法

在生物系统中，游离活性氧量很低，因此测定时需要灵敏的方法如脉冲射解、电子自旋共振等技术，但仪器较贵。由线粒体产生的H2O2，存在时间较长，能使DCFH探针的荧光物被氧化成DCF（二氯荧光素双乙酸盐），DCF可被酯酶裂解成二氯荧光素，以二氯荧光素为基础的荧光法，可检测H2O2、O2-和OH-，这种方法较简单，但特异性较低。以亚铁血红素过氧化物酶/辣根过氧化物酶催化H2O2氧化荧光物、产生荧光素的荧光法，特异性和灵敏度较高;通过测定活性氧损伤的产物如脂质过氧化物（oxLDL）和DNA损伤产物（8-羟基鸟嘌呤）等，可间接反映活性氧产量。不成对电子使H2O2，等带有顺磁共振特性，可被EPR光谱法测量，但需要特殊的设备。使用氧化还原反应中分子间能量转移，使发光氨还原后可与O2-，反应产生产物并发光，这种方法非常灵敏，已经用于测定完整细胞、单独的线粒体及线粒体亚颗粒中的O2-含量。

活性氧（reactive oxygen species，ROS）广泛指代氧来源的自由基和非自由基，包含了超氧阴离子（O2-）、过氧化氢（H2O2）、羟自由基（OH-）、臭氧（O3）和单线态氧（1O2），由于它们含有不成对的电子，因而具有很高的化学反应活性。

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