核酸染料SYBR Green I
产品简介:
本品用DMSO溶解,因为DMSO熔点是18.3℃,使用前请放置到室温充分溶解。
操作步骤(仅供参考):
一、胶染法(用法通EB)( 推荐方法,见图1)
1、制胶时加入SYBR Green I 核酸染料。冷却胶到 50℃左右,每100ml胶中加入1-3µl
SYBR Green I核酸染料(见图 1)。
2、按照常规方法进行电泳即可。
3、用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃,观测聚丙烯酰胺凝胶时,
可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
需要注意的是:此方法染色能准确确定片段分子量且用量较少。1ml 染料可以做 1000 块10 ml 胶,每块胶点50个样,可做50000次。
二、点染法(见图3)
1、该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
2、工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SYBR Green I 稀释100倍,即为SYBR Green
I 工作液。SYBR Green I 工作液可以置2~8℃保存一个月以上, 浓缩液在-20℃保存半年。
3、制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
4、样品染色:向分析样品中加入SYBR Green I 工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,
使SYBR Green I 与样品中DNA充分结合。SYBR Green I 工作液加入量为总上样量的1/5~
1/10。
5、DNA Marker染色:将5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀释液和1μL SYBR Green
I 工作液混匀,室温放置5分钟,使SYBR Green I 与DNA充分结合。
6、上样、电泳:按常规操作。用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻
璃,观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
注意:用点染法染色时,染料用量少。通常点一个样加入 1µL 即可,可以
使用 10000 次, 但大片段稍有滞后现象,如果需要更准确确定分子量(与Marker对比),建议使用胶染法。
三、泡染法
1、按照常规方法进行制胶,其中不含任何染料。
2、用 pH 7.0 - 8.5 的缓冲液(如:TAE, TBE),按照 1﹕1000 的比例稀释SYBR Green
I 核酸染料,混匀,制成染色溶液。
3、将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室
温振荡染色 10-30 分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直 接在玻璃平
皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆 盖整个胶板,并染色 30
分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
4、用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃,观测聚丙烯酰胺凝胶时,
可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
需要注意的是:用泡染方法染色时,可以确定核酸片段分子量。但是三种方法中染料用量的。
几种染色方法特点比较:
储存条件:2-8℃避光干燥可保存24个月
注意事项:
1、 Sybr Green 核酸染料样品点染方法中,电泳不要超过 2 小时,以免核酸染料从 DNA/RNA 上分离出来,产生弥散状条带。
2、用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段分子量(和 Marker 对比),建议用胶染法和泡染法。
3、常规用酒精沉淀核酸过程中,SYBR Green I 核酸染料可以全部从核酸上去掉。
4、DNA电泳请选择SYBR Green I 染料,RNA 电泳请选择SYBR Green II染料,两种染料不通用。
5、SYBR Green I 核酸染料对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染 色等使用过程中用聚丙烯类容器。
可以加Orange Red 作为标记. pH值在7.5-8.3之间,不要微波加热,加入热胶的温度低于50度。
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以上内容来自齐岳小编zzj 2021.5.18