绿色荧光蛋白(GFP)是一种能够发出绿色荧光的蛋白质,它存在于维多利亚多管水母体内。发现维多利亚多管水母(A. victoria)可以发出蓝绿色的光。在研究,他们从维多利亚多管水母(A. victoria)中分离纯化出水母素,同时还发现了维多利亚多管水母(A. victoria)体内有绿色荧光蛋白存在。在1963年,发现钙离子可以增强水母素的发光,在进一步的研究中从维多利亚多管水母(A. victoria)分离纯化出GFP的晶体。而且还发现在没有GFP存在时,水母素能够发出很弱的蓝色荧光,波长为470 nm;钙离子和水母素结合后,将能量传递给GFP,导致GFP在紫外光下发出绿色荧光,波长为509 nm。
1、荧光蛋白结构以及发光特性
GFP结构
一级结构:GFP的生色团位于64至69的六肽内,更准确的说是65至67残基(野生型GFP中是Ser-Try-Gly)生成的4-(对-羟基苯亚甲基)咪唑-5-啉酮。图一为生色集团形成机制
图1:生色团形成机制
晶体机构:绿色荧光蛋白晶体的立体结构是由11条β桶装结构绕成的一个圆柱体,一条α螺旋缠绕在圆柱体的轴位置。生色团附着在α螺旋上,几乎完美地包埋于圆柱体中心。这种方式被称为β罐(图2)。
图2:GFP的三维结构
GFP发光特性
对GFP的氨基酸序列和发光特性进行研究,结果不表明:水母素要将能量传递给GFP后才可以让GFP发出绿色的荧光;而GFP则能够在蓝光的激发下,直接发出绿色荧光
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