CRISPR/Cas9基因敲入小鼠，技术服务

CRISPR/Cas9 技术的出现为构建基因敲入小鼠提供了一种高效的方法。首先，确定要敲入的目标基因和敲入位点是关键的第一步。这需要对目标基因的功能以及小鼠基因组有深入的了解。选择合适的敲入位点可以确保敲入的基因能够在小鼠体内正确表达和发挥作用，同时避免对小鼠的正常生理功能产生不良影响。

设计针对目标位点的引导 RNA（gRNA）和含有目标基因的供体 DNA。gRNA 能够引导 Cas9 蛋白特异性地识别并结合到目标基因组位置，然后 Cas9 蛋白对 DNA 进行切割，产生双链断裂。供体 DNA 则包含要敲入的目标基因以及与目标位点两侧同源的序列，以便通过同源重组的方式将目标基因整合到小鼠基因组中。

将 gRNA、Cas9 蛋白和供体 DNA 通过显微注射等方法导入小鼠的受精卵或胚胎干细胞中。在受精卵阶段，将这些元件直接注射到受精卵的细胞质或细胞核中。对于胚胎干细胞，则可以通过基因编辑技术在细胞中进行基因敲入，然后将编辑后的胚胎干细胞注入到小鼠囊胚中。

一旦进入细胞，Cas9 蛋白在 gRNA 的引导下对目标位点进行切割，然后细胞会通过同源重组机制将供体 DNA 中的目标基因整合到基因组中。在小鼠发育过程中，这些整合了目标基因的细胞会参与到组织和器官的形成中，从而产生基因敲入小鼠。

为了筛选出成功敲入基因的小鼠，需要进行一系列的鉴定方法。可以通过 PCR、Southern 印迹、测序等方法确认目标基因是否准确地插入到了目标位点。同时，还可以通过检测基因的表达水平和蛋白质功能以及观察小鼠的表型变化来评估基因敲入的效果。

齐岳生物提供专业基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求，结合靶基因的情况，设计不同的基因敲除方案。例如，移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。

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西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。