Tag标签敲入（无痕敲入），技术服务

Tag 标签敲入，尤其是无痕敲入技术，是现代分子生物学中一项极具价值的技术手段，为深入研究基因和蛋白质的功能提供了有效的方法。

无痕敲入的核心目标是在不留下任何额外的外源序列（除了 Tag 标签本身）的情况下，将 Tag 标签精确地插入到目标基因中。这样可以最大程度地减少对目标基因和其编码蛋白质的功能干扰，确保研究结果的准确性和可靠性。

首先，需要选择合适的 Tag 标签。常见的 Tag 标签包括荧光蛋白标签（如 GFP、RFP 等）、亲和标签（如 His - tag、Flag - tag 等）和酶标签（如 luciferase 等）。这些标签具有不同的特性和用途，例如荧光蛋白标签可用于直观地观察蛋白质在细胞内的定位和动态变化，亲和标签则便于蛋白质的纯化和相互作用研究。

接下来，设计精确的敲入策略。这通常依赖于先进的基因编辑技术，如 CRISPR/Cas9 系统。通过设计针对目标基因特定位置的引导 RNA（gRNA），Cas9 蛋白能够在该位置制造 DNA 双链断裂（DSB）。同时，准备好包含 Tag 标签和与目标基因两侧同源序列的敲入模板。

在细胞内，当 Cas9 蛋白介导的 DSB 发生后，细胞的修复机制会被激活。通过同源重组（HR），敲入模板中的 Tag 标签和同源序列会与目标基因的断裂位点进行精确的重组，将 Tag 标签无缝地插入到目标基因中。而在修复过程完成后，细胞自身的机制会去除敲入模板中除了 Tag 标签以外的多余序列，实现无痕敲入。

为了筛选出成功敲入 Tag 标签的细胞，通常会在敲入模板中引入筛选标记，如抗性基因。只有成功整合了敲入模板的细胞才能在含有相应抗生素的培养基中存活。随后，通过一系列的鉴定方法，如 PCR 扩增、测序和蛋白质免疫印迹等，来确认 Tag 标签是否准确无误地插入到目标基因中，以及蛋白质的表达和功能是否受到影响。

Tag 标签敲入（无痕敲入）技术具有许多显著的优点。它不仅能够精确地标记目标蛋白质，还能够在不改变蛋白质天然结构和功能的前提下，对其进行实时监测和动态分析。这对于研究蛋白质的细胞内定位、转运、相互作用以及蛋白质 - 核酸相互作用等方面具有重要意义。

此外，无痕敲入技术还可以应用于大规模的蛋白质组学研究中，帮助构建蛋白质相互作用网络，揭示细胞内复杂的生物过程。在疾病研究方面，该技术可以用于研究疾病相关蛋白质的功能变化，为疾病的诊断和治疗提供新的靶点和策略。

然而，Tag 标签敲入（无痕敲入）技术也并非毫无挑战。基因编辑的效率和准确性可能会受到多种因素的影响，如细胞类型、基因位点的复杂性以及敲入模板的设计等。此外，筛选和鉴定过程也需要耗费大量的时间和精力，并且需要高度灵敏和特异的检测方法。

齐岳生物提供专业基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求，结合靶基因的情况，设计不同的基因敲除方案。例如，移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

推荐服务：

谷氨酰胺转胺酶基因的定点突变

PCR介导的定点突变

抗菌肽Protegrin基因的定点诱变

诱导基因组DNA碱基变异

NOS1AP基因单碱基突变

基因单碱基突变

基因多位点单碱基编辑

FGA基因座单碱基突变

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。