荧光/蛋白标签定点敲入，基因敲入的定制服务

齐岳基因提供多种类型的基因敲入服务，无论是荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、HiBiT定点敲入等等，均可构建。

服务种类：

1.基因插入<20bp

2.基因插入20bp-100bp

3.基因插入>100bp

基因敲入是指将一个新的基因或DNA序列插入到基因组中的一个特定位置。可以通过同源重组、病毒载体或CRISPR/Cas9来实现。同源重组介导的基因敲入需要将一个包含所需基因序列的修饰DNA片段引入到目标位点；病毒载体，如逆转录病毒或腺相关病毒（AAVs），可以用来将新基因传递到基因组中；CRISPR/Cas9也可以通过使用供体DNA模板以及sgRNA和Cas9酶来插入一个基因。

荧光 / 蛋白标签定点敲入是一种强大的分子生物学技术，它允许研究人员在特定基因的特定位置精确地插入荧光或蛋白标签，从而为研究基因和蛋白质的功能、定位及相互作用提供了有力的手段。

首先，确定敲入的目标基因和位点是关键的第一步。这需要对目标基因的结构和功能有深入的了解，以及对研究目的的清晰认识。例如，如果想要研究某个蛋白质在细胞内的定位，就需要选择一个合适的位点来插入荧光标签，使其能够在不影响蛋白质功能的前提下，准确地反映蛋白质的位置信息。

接下来，设计并构建用于敲入的载体。这个载体通常包含荧光 / 蛋白标签序列、同源重组臂以及筛选标记等元件。同源重组臂是与目标基因两侧序列同源的片段，它们能够引导载体在目标位点进行精确的整合。荧光 / 蛋白标签序列则是我们要插入到目标基因中的部分，它可以是荧光蛋白（如绿色荧光蛋白 GFP、红色荧光蛋白 RFP 等）或其他具有特定功能的蛋白标签（如 FLAG 标签、His 标签等）。筛选标记则用于筛选出成功敲入标签的细胞。

然后，通过合适的方法将构建好的载体导入细胞中。常用的方法包括电穿孔、脂质体转染、病毒感染等。载体进入细胞后，会利用细胞自身的同源重组机制，将荧光 / 蛋白标签精确地插入到目标基因的指定位置。

为了筛选出成功敲入标签的细胞，需要使用筛选标记进行筛选。例如，如果载体中携带了抗性基因，那么只有成功整合了载体的细胞才能在含有相应抗生素的培养基中存活。筛选出的细胞还需要进行进一步的鉴定和验证。

鉴定和验证的方法包括多种分子生物学技术和细胞生物学技术。通过 PCR 扩增和测序可以确定标签是否准确地插入到了目标位点；通过免疫荧光染色或荧光显微镜观察可以直观地看到荧光 / 蛋白标签在细胞内的分布情况，从而确定蛋白质的定位；通过 Western blotting 可以检测到带有标签的蛋白质的表达情况，进而判断敲入是否影响了蛋白质的表达水平。

荧光 / 蛋白标签定点敲入技术具有许多优点。它能够在活细胞中实时、动态地观察蛋白质的行为，为研究蛋白质的功能和细胞内的生命活动提供了直观的证据。同时，蛋白标签还可以用于蛋白质的纯化和相互作用研究，帮助我们深入了解蛋白质之间的复杂网络。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。