利用CRISPR-Cas9技术构建基因敲除小鼠胚胎干细胞系，基因敲除的定制服务

小鼠胚胎干细胞（Embryonic Stem Cells，ESCs）具有自我更新和多向分化的能力，利用 CRISPR - Cas9 技术构建基因敲除小鼠胚胎干细胞系为基因功能研究和疾病模型的建立提供了强大的工具。

首先，确定要敲除的目标基因。这需要根据研究目的和已知的基因功能来选择。例如，如果研究某个与发育相关的基因，就将其确定为敲除目标。

然后，设计针对目标基因的 sgRNA（single - guide RNA）。sgRNA 能够引导 Cas9 蛋白到特定的基因组位置。通过对目标基因序列的仔细分析，选择合适的靶点设计 sgRNA，以确保其特异性和高效性。同时，要利用生物信息学工具预测并尽量减少脱靶效应。

接下来，将 sgRNA 和 Cas9 蛋白导入小鼠胚胎干细胞中。这可以通过多种方法实现，如电穿孔、脂质体转染或病毒载体介导的感染等。一旦进入细胞，Cas9 蛋白在 sgRNA 的引导下，对目标基因进行切割，造成 DNA 双链断裂。

细胞会通过自身的修复机制对断裂的 DNA 进行修复。非同源末端连接（NHEJ）修复通常会导致基因的插入或缺失，从而破坏基因的功能，实现基因敲除。为了筛选出成功敲除目标基因的胚胎干细胞，通常需要使用一些筛选标记或方法。例如，可以在敲除载体中引入抗性基因，只有成功敲除目标基因并整合了抗性基因的细胞才能在含有相应抗生素的培养基中存活和增殖。

对筛选得到的基因敲除胚胎干细胞进行进一步的鉴定和验证。可以通过 PCR 扩增和测序等方法确认目标基因是否被成功敲除。同时，还可以通过检测基因的表达水平（如 mRNA 水平或蛋白质水平）来验证敲除效果。此外，还需要对基因敲除胚胎干细胞的生物学特性进行评估，如细胞的增殖能力、分化潜能等，以确保其仍然保持胚胎干细胞的基本特性。

构建成功的基因敲除小鼠胚胎干细胞系可以用于多种研究。例如，可以将其分化为不同的细胞类型，观察在细胞分化过程中基因敲除对细胞命运决定和功能的影响。还可以将基因敲除胚胎干细胞注射到小鼠囊胚中，构建基因敲除小鼠，进一步在整体动物水平上研究基因的功能。

利用 CRISPR - Cas9 技术构建基因敲除小鼠胚胎干细胞系具有许多优点。它可以快速、高效地实现基因敲除，并且可以精确地控制敲除的位点和方式。此外，通过对胚胎干细胞的操作，可以在体外进行大量的基因功能研究和药物筛选，为生命科学研究和医学应用提供了重要的资源。

然而，在构建基因敲除小鼠胚胎干细胞系的过程中，也需要注意一些问题。例如，脱靶效应可能会导致其他基因的意外突变，影响细胞的正常功能。

齐岳生物生物提供基因敲入细胞定制服务，荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、基因敲入等均可实现。我们提供其定制服务，包括多种类型的细胞基因KI和全流程的服务支持。

基因敲入服务

提供多种类型的基因敲入服务，无论是荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、HiBiT定点敲入等等，均可构建。

基因敲入细胞定制服务，荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、安全位点基因敲入等均可实现。我们提供全方位的服务，包括多种类型的细胞基因KI和全流程的服务支持。"

"基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求，结合靶基因的情况，设计不同的基因敲除方案。例如，移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。交付敲除纯合子单克隆，以及提供相应的数据报告和后续的技术指导。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。