基于CRISPR/Cas9技术构建严重联合免疫缺陷小鼠，实验外包

严重联合免疫缺陷（Severe Combined Immunodeficiency，SCID）小鼠是一种免疫系统严重受损的动物模型，在免疫学研究、疾病模型构建和药物研发等方面具有重要价值。CRISPR/Cas9 技术的出现为构建严重联合免疫缺陷小鼠提供了一种高效的方法。

首先，需要确定与免疫系统发育和功能相关的基因作为编辑目标。例如，常见的靶点包括参与淋巴细胞发育和功能的关键基因。通过对这些基因的深入研究，选择合适的位点进行基因编辑。

设计针对目标基因的 sgRNA（single - guide RNA）是构建严重联合免疫缺陷小鼠的关键步骤之一。sgRNA 能够引导 Cas9 蛋白特异性地识别并结合到目标基因组序列上。利用生物信息学工具和实验验证，优化 sgRNA 的设计，以确保其特异性和编辑效率。

接下来，将 sgRNA 和 Cas9 蛋白导入小鼠的受精卵或胚胎干细胞中。可以通过显微注射、电穿孔等方法将基因编辑工具递送到细胞内。Cas9 蛋白在 sgRNA 的引导下，对目标基因进行切割，导致 DNA 双链断裂。

细胞会通过自身的修复机制对断裂的 DNA 进行修复。非同源末端连接（NHEJ）修复机制通常会导致基因的插入或缺失，从而破坏基因的功能。通过这种方式，可以在小鼠基因组中引入特定的基因突变，导致免疫系统相关基因的失活。

将经过基因编辑的受精卵或胚胎干细胞移植到代孕母鼠体内，使其发育成完整的小鼠个体。出生后的小鼠需要进行严格的筛选和鉴定，以确定是否成功构建了严重联合免疫缺陷小鼠。可以通过检测免疫细胞的数量和功能、免疫球蛋白的水平等指标来评估小鼠的免疫缺陷状态。

构建成功的严重联合免疫缺陷小鼠表现出免疫系统严重受损的特征，如淋巴细胞数量显著减少、免疫应答能力低下等。这些小鼠可以用于研究免疫系统的发育和功能、病原体感染机制以及免疫治疗方法等。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

服务特点

a、适用于在同一个细胞系中需要进行多个基因敲除的实验；

b、基因敲除效率比直接质粒转染更高；

c、提供多种不同荧光和抗性标记的慢病毒表达载体，更易筛选到基因敲除成功细胞；

d、接受cas9蛋白稳定表达不同细胞系定制。 

服务流程

A、cas9载体构建及慢病毒包装

 将cas9基因CDS区克隆至慢病毒载体，并进行cas9慢病毒包装。

B、稳定株筛选

 将cas9慢病毒感染特定的目的细胞，进行cas9稳定表达的细胞株筛选。

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。