利用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除小鼠，基因敲除技术服务

为满足基础研究及医药研发的需求，科研领域急需获得系列靶基因/全基因组的敲除细胞。齐岳生物生物科技（齐岳生物）采用优化的CRISPR/Cas9系统为您提供高通量基因敲除服务，我们的人全基因组基因敲除阵列Array文库覆盖了完整的人类全基因组，全基因组阵列敲除库已在人原代细胞全部完成高内涵筛选的验证，超过80%以上的靶点达到70%以上的敲除效率。

CRISPR/Cas9 技术的出现为构建基因敲除小鼠提供了一种高效、便捷的方法。

首先，需要确定要敲除的目标基因。通过对基因功能的研究和分析，选择具有重要生物学意义的基因进行敲除。然后，设计针对目标基因的 sgRNA（single - guide RNA）。sgRNA 能够引导 Cas9 蛋白到特定的基因组位置。

接下来，将 sgRNA 和 Cas9 蛋白的表达载体构建好。可以通过化学合成或分子克隆的方法获得 sgRNA 序列，并将其与 Cas9 蛋白的编码序列连接到合适的载体上。

之后，通过显微注射的方法将构建好的载体导入小鼠的受精卵中。在受精卵中，Cas9 蛋白在 sgRNA 的引导下，对目标基因进行切割，造成 DNA 双链断裂。细胞自身的修复机制可能会导致基因的插入、缺失或突变，从而实现基因敲除。

为了提高基因敲除的效率，还可以在注射的同时提供一些辅助手段。例如，可以优化注射的剂量和时间，或者使用一些增强基因编辑效率的试剂。

在受精卵发育成胚胎后，将胚胎移植到代孕母鼠体内。代孕母鼠经过一段时间的妊娠后，会产下幼鼠。这些幼鼠中可能存在基因敲除的个体。

为了鉴定幼鼠是否成功敲除了目标基因，需要采用多种方法进行检测。常用的方法包括 PCR 扩增和基因测序。通过 PCR 扩增目标基因区域，并对扩增产物进行测序，可以确定基因是否发生了突变。此外，还可以通过检测蛋白质表达水平或观察小鼠的表型变化来进一步验证基因敲除的效果。

基因过表达细胞稳转株多克

基因过表达细胞稳转株单克隆

插入序列2000 bp以下的基因序列

插入序列2000 bp-3000 bp的基因序列

插入序列3000 bp-4000 bp的基因序列

插入序列4000 bp-5000 bp的基因序列

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。