利用CRISPR/Cas9技术构建定点突变小鼠品系，基因敲除的实验外包

CRISPR/Cas9 技术为构建定点突变小鼠品系极大地推动了基因功能研究和疾病模型的建立。首先，需要确定要突变的目标基因和突变位点。通过对基因功能的研究和疾病相关突变的分析，选择具有重要意义的位点进行突变。然后，设计相应的 sgRNA（single - guide RNA）。sgRNA 能够引导 Cas9 蛋白到特定的基因组位置。

接下来，将 sgRNA 和 Cas9 蛋白的表达载体通过显微注射等方法导入小鼠的受精卵中。Cas9 蛋白在 sgRNA 的引导下，会在目标位点造成 DNA 双链断裂。细胞自身的修复机制会对断裂的 DNA 进行修复，从而引入定点突变。

在细胞修复过程中，可能会发生非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HR）。NHEJ 修复通常会导致碱基的插入或缺失，从而改变基因的编码序列。如果在注射的同时提供同源修复模板，细胞则更有可能通过 HR 进行精确的定点突变。

为了获得定点突变小鼠品系，需要将注射后的受精卵移植到代孕母鼠体内，使其发育成个体。出生后的小鼠需要进行基因鉴定，以确定是否成功引入了定点突变。常用的鉴定方法包括 PCR 扩增和测序等。

构建成功的定点突变小鼠品系可以用于多种研究。例如，可以研究基因特定位点突变对蛋白质结构和功能的影响，进而揭示基因的作用机制。此外，定点突变小鼠品系还可以用于模拟人类疾病中的基因突变，为疾病的研究和治疗提供更准确的动物模型。

与传统的基因打靶技术相比，CRISPR/Cas9 技术具有操作简单、效率高、成本低等优点。它不仅可以实现单个碱基的替换，还可以进行小片段的插入或缺失，为基因功能研究和疾病模型构建提供了更广阔的空间。

服务类型

单基因移码/片段敲除

多基因敲除（双敲/多敲）

肿瘤细胞和细胞系敲除

ESC或iPSC干细胞敲除

齐岳生物生物提供的基因敲入细胞定制服务，包括荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、基因敲入等。通过核转染法将 CRISPR/Cas9 系统的 gRNA 载体（含 Cas9）与携带目的片段的 Donor 共转入细胞中，在 gRNA 和 Cas9 复合物造成靶位点 DNA 双链断裂后，细胞以 Donor 作为模板进行同源重组修复（HDR）实现目的片段的定点敲入。客户可以根据自己的需求选择不同的服务类型。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。