使用CRISPR/Cas9技术和TALEN技术敲除斑马鱼特定基因片段,基因敲除技术服务
斑马鱼是一种重要的模式生物,在发育生物学、遗传学等领域有着广泛的应用。CRISPR/Cas9 技术和 TALEN 技术都可以用于敲除斑马鱼的特定基因片段,帮助我们深入了解基因的功能。
CRISPR/Cas9 技术通过设计特定的 sgRNA(single - guide RNA)来引导 Cas9 蛋白对目标 DNA 进行切割。首先,针对要敲除的斑马鱼基因片段,设计合适的 sgRNA。sgRNA 能够与目标基因的特定序列互补结合。然后,将 sgRNA 和 Cas9 蛋白的 mRNA 一起注射到斑马鱼的受精卵中。Cas9 蛋白在 sgRNA 的引导下,会在目标基因处造成 DNA 双链断裂。细胞自身的修复机制可能会导致基因的插入、缺失或突变,从而实现基因敲除。
TALEN(Transcription Activator - Like Effector Nucleases)技术则是通过设计特定的 TALE 蛋白与核酸酶结合来识别和切割目标 DNA。同样地,需要针对目标基因设计特异性的 TALEN 模块。这些模块能够识别并结合到目标基因的特定序列上,然后核酸酶部分会切割 DNA,引发基因敲除。
在使用这两种技术敲除斑马鱼基因片段时,都需要进行仔细的设计和优化。例如,选择合适的靶点可以提高敲除效率并减少脱靶效应。同时,注射的时机和剂量也会对敲除效果产生影响。
敲除特定基因片段后,可以通过多种方法来检测敲除效果。可以通过 PCR 扩增目标基因区域并进行测序,观察是否存在基因突变。还可以通过观察斑马鱼的表型变化来推断基因的功能。例如,如果敲除某个与发育相关的基因,可能会导致斑马鱼出现形态异常或发育缺陷。
CRISPR/Cas9 技术和 TALEN 技术各有优缺点。CRISPR/Cas9 技术设计简单、操作方便,但其脱靶效应可能相对较高。TALEN 技术的特异性较高,但设计和构建过程相对复杂。在实际应用中,科学家可以根据具体情况选择合适的技术。
齐岳基因提供多种类型的基因敲入服务,无论是荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、HiBiT定点敲入等等,均可构建。
服务种类:
1.基因插入<20bp
2.基因插入20bp-100bp
3.基因插入>100bp
西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括:
(1)过表达质粒构建;
(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)
(3)构建基因截短体质粒;
(4)亚克隆质粒构建;
(5)通过慢病毒介导的基因过表达;
(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减
(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除
注意事项:
本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。
使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。
请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。