基于CRISPR/Cas9技术的烟草NtDXR基因敲除，实验外包

烟草是一种重要的经济作物，对其基因功能的研究有助于改良烟草品质和提高抗逆性。NtDXR 基因在烟草的代谢过程中具有重要作用，利用 CRISPR/Cas9 技术敲除 NtDXR 基因可以深入了解其功能。

首先，设计针对 NtDXR 基因的 sgRNA。通过对 NtDXR 基因序列的分析，选择合适的靶点来设计 sgRNA，以确保其能够准确地引导 Cas9 蛋白对目标基因进行切割。

然后，将 sgRNA 与 Cas9 蛋白的表达载体构建好。这个载体将被用于转化烟草细胞。

接下来，通过农杆菌介导转化或其他合适的方法，将构建好的载体导入烟草细胞或组织中。农杆菌可以将载体上的基因整合到烟草细胞的基因组中。

在烟草细胞内，Cas9 蛋白在 sgRNA 的引导下，对 NtDXR 基因进行切割，产生 DNA 双链断裂。细胞的修复机制会对这些断裂进行修复，非同源末端连接（NHEJ）修复可能会导致基因的插入或缺失，从而实现基因敲除。

为了筛选出成功敲除 NtDXR 基因的烟草细胞或植株，需要进行筛选和鉴定。可以通过 PCR 扩增 NtDXR 基因的特定区域，并进行测序分析，查看是否存在基因突变。同时，还可以通过检测 NtDXR 基因的表达水平或相关代谢产物的变化来确认基因敲除的效果。

敲除 NtDXR 基因后，烟草的代谢过程可能会发生改变。例如，NtDXR 基因参与的代谢途径可能会受到影响，导致某些代谢产物的含量发生变化。通过对这些变化的研究，可以深入了解 NtDXR 基因在烟草代谢中的具体作用。

此外，NtDXR 基因敲除的烟草植株可能在抗逆性等方面表现出不同的特性。这对于培育具有更好抗逆性的烟草品种具有重要意义。

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（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。