利用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除大鼠及小鼠模型，基因敲除技术服务

CRISPR/Cas9 技术已成为构建基因敲除大鼠及小鼠模型的有力工具。

对于构建基因敲除小鼠模型，如前所述，设计针对目标基因的 sgRNA 并与 Cas9 蛋白表达载体结合后，通过显微注射将其导入小鼠受精卵。受精卵在代孕母鼠体内发育，产生基因敲除小鼠。

在构建基因敲除大鼠模型时，原理与小鼠模型相似，但也存在一些挑战。大鼠的生殖生理和胚胎操作技术与小鼠有所不同。同样地，先设计合适的 sgRNA 和 Cas9 载体，然后通过特定的方法将其导入大鼠受精卵。

在基因敲除过程中，Cas9 蛋白在 sgRNA 的引导下对目标基因进行切割，细胞通过非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HR）机制修复 DNA 双链断裂。NHEJ 修复通常会导致基因的插入或缺失，从而破坏基因的阅读框，实现基因敲除。而 HR 修复可以通过引入外源的同源模板，实现基因敲除或修饰。

为了筛选出成功敲除基因的大鼠或小鼠，需要进行多种检测。除了基因水平的 PCR 测序外，还可以通过蛋白质水平的检测，如 Western blotting，以及观察动物的表型变化来确定基因敲除的效果。

齐岳生物生物提供的基因敲入细胞定制服务，包括荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、基因敲入等。通过核转染法将 CRISPR/Cas9 系统的 gRNA 载体（含 Cas9）与携带目的片段的 Donor 共转入细胞中，在 gRNA 和 Cas9 复合物造成靶位点 DNA 双链断裂后，细胞以 Donor 作为模板进行同源重组修复（HDR）实现目的片段的定点敲入。客户可以根据自己的需求选择不同的服务类型。

基因敲入细胞定制流程

根据客户需求和靶基因的情况进行基因点突变方案设计

构建gRNA载体和Donor载体

通过核转染法将gRNA载体和Donor载体共转入目标细胞

筛选出成功实现目的片段定点敲入的阳性克隆

对阳性克隆进行扩增和测序验证

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。