提前引入终止密码子实现无脱靶风险的基因敲除，实验外包

在基因编辑领域，实现无脱靶风险的基因敲除是一个重要的研究方向。提前引入终止密码子是一种有效的策略。

当我们希望敲除某个基因时，可以通过设计 sgRNA 引导 Cas 蛋白在目标基因的特定位置引入终止密码子。这样，在基因转录过程中，当 RNA 聚合酶遇到这个提前引入的终止密码子时，就会提前终止转录，导致生成的 mRNA 是不完整的，无法翻译出完整的蛋白质，从而实现基因敲除的效果。

与传统的通过造成 DNA 双链断裂来实现基因敲除的方法相比，提前引入终止密码子具有多个优点。首先，它可以避免 DNA 双链断裂引起的非同源末端连接（NHEJ）或同源重组修复（HR）过程中可能出现的脱靶效应。因为它不依赖于 DNA 双链断裂后的修复机制，所以大大降低了对基因组其他位置产生意外修饰的风险。

其次，提前引入终止密码子的方法相对更加精确和可控。通过精心设计 sgRNA，可以准确地在目标位置引入终止密码子，对基因功能进行特异性的抑制。

在实验操作中，需要准确地选择引入终止密码子的位置。一般来说，选择在基因的关键功能区域或编码重要结构域的部位引入终止密码子，这样可以更有效地破坏基因的功能。同时，还需要对敲除效果进行严格的验证。可以通过 PCR 扩增和测序来确定终止密码子是否成功引入，以及通过 Western blotting 等方法检测蛋白质表达水平的变化。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

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