单gRNA载体应用于移码或片段敲除,基因敲除的实验外包
单 gRNA(guide RNA)载体在基因编辑中发挥着重要作用,特别是在实现移码或片段敲除方面。
单 gRNA 载体的核心是设计的 sgRNA,它能够与 Cas 蛋白(如 Cas9)结合,引导其识别并结合到基因组的特定位置。在移码敲除中,sgRNA 被设计在目标基因的编码区,Cas 蛋白在该位置切割 DNA 双链,导致基因发生双链断裂。细胞通过非同源末端连接(NHEJ)修复这种断裂时,往往会引入一些小的插入或缺失突变,从而改变基因的阅读框,使翻译出的蛋白质失去功能,实现移码敲除。
对于片段敲除,单 gRNA 载体可以通过设计多个 sgRNA 来实现。这些 sgRNA 分别靶向目标基因片段的两端或多个位置。当 Cas 蛋白在这些位置切割 DNA 后,细胞的修复机制可能无法完全修复被切割的大片段 DNA,从而导致基因片段的缺失,实现片段敲除。
单 gRNA 载体应用于移码或片段敲除具有多种优势。它操作相对简便,只需设计和构建合适的 sgRNA 载体即可进行基因编辑操作。此外,单 gRNA 载体可以通过转染等方式高效地导入细胞中,实现大规模的基因编辑。在研究基因功能方面,移码或片段敲除可以更彻底地破坏基因功能,帮助研究人员更准确地了解基因在细胞生理和病理过程中的作用。
然而,单 gRNA 载体的应用也存在一些局限性。例如,NHEJ 修复的结果具有一定的随机性,可能导致不同细胞中移码或片段敲除的效果不一致。此外,基因编辑过程中可能会出现脱靶效应,对其他非目标基因造成意外的修饰,从而影响细胞的正常功能。因此,在使用单 gRNA 载体进行移码或片段敲除时,需要进行严格的实验设计和质量控制,以确保基因编辑的准确性和特异性。
总之,单 gRNA 载体为移码或片段敲除提供了一种有效的工具,在基因功能研究、疾病模型构建和基因治疗等领域具有广阔的应用前景。
齐岳生物生物自主开发的 CRISPR 细胞基因编辑系统,显著提高基因敲入细胞株构建过程中的高同源重组效率,并降低随机插入风险。
西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括:
(1)过表达质粒构建;
(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)
(3)构建基因截短体质粒;
(4)亚克隆质粒构建;
(5)通过慢病毒介导的基因过表达;
(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减
(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除
注意事项:
本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。
使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。
请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。