基因敲除细胞系构建，基因敲除细胞株，敲除细胞系，基因敲除技术服务

齐岳生物提供专业基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求，结合靶基因的情况，设计不同的基因敲除方案。例如，移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。交付敲除纯合子单克隆，以及提供相应的数据报告和后续的技术指导。

基因敲除细胞系构建的一般步骤

确定目标基因

根据研究目的，选择要敲除的特定基因。这可能是与疾病相关的基因、参与特定生物学过程的基因等。

选择基因敲除技术

目前常用的基因敲除技术主要有 CRISPR/Cas9 技术、同源重组技术、TALEN 技术等。

CRISPR/Cas9 技术因其高效、简便等优点，被广泛应用。它通过设计与目标基因序列互补的 sgRNA（向导 RNA），引导 Cas9 核酸酶对目标基因进行切割，使基因发生双链断裂，细胞通过非同源末端连接或同源定向修复机制修复双链断裂，从而实现基因敲除。

设计和构建敲除载体

对于 CRISPR/Cas9 技术，需要设计合成针对目标基因的 sgRNA，并将其克隆到合适的载体中。载体中通常还会包含一些标记基因，如抗生素抗性基因，以便于筛选敲除成功的细胞。

对于同源重组技术，需要构建含有与目标基因同源序列以及选择标记基因的载体。

细胞转染

将构建好的敲除载体导入细胞中。常用的转染方法有脂质体转染、电穿孔转染、病毒载体转染等。

根据不同的细胞类型和实验要求，选择合适的转染方法，以提高转染效率和细胞存活率。

筛选和鉴定敲除细胞

如果转染载体中含有选择标记基因，可以使用相应的药物对转染后的细胞进行筛选，以获得稳定表达选择标记基因的细胞。

通过分子生物学方法，如 PCR、Western blot、测序等，对筛选出的细胞进行鉴定，确认目标基因是否被成功敲除。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。