构建基因敲除的细胞系，定制服务

齐岳生物生物提供基因敲入细胞定制服务，荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、基因敲入等均可实现。我们提供其定制服务，包括多种类型的细胞基因KI和全流程的服务支持。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。

构建基因敲除的细胞系通常可以通过以下步骤进行：

一、确定目标基因

首先，明确要敲除的目标基因。这需要根据研究目的和问题来选择，例如，研究某个特定基因在细胞生理过程中的作用。

二、选择基因敲除技术

传统的同源重组技术

原理：利用细胞内的同源重组机制，将带有特定突变（如缺失目标基因部分序列）的 DNA 片段导入细胞，与细胞内的基因组发生同源重组，从而实现基因敲除。

优点：可以精确地敲除目标基因，并且可以进行特定的基因突变设计。

缺点：效率相对较低，操作较为复杂。

CRISPR/Cas9 技术

原理：通过设计与目标基因序列互补的 sgRNA（single guide RNA），引导 Cas9 核酸酶对目标基因进行切割，产生双链断裂。细胞通过非同源末端连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）机制修复双链断裂，从而实现基因敲除或引入特定突变。

优点：操作简单、高效，可同时敲除多个基因，并且可以进行的基因编辑。

缺点：可能存在脱靶效应，需要进行严格的验证。

三、设计和构建敲除载体

对于同源重组技术

构建含有与目标基因同源序列以及选择标记基因（如抗生素抗性基因）的载体。同源序列的长度通常在几百到几千个碱基对之间，以提高同源重组的效率。

对于 CRISPR/Cas9 技术

设计合成 sgRNA，并将其克隆到合适的载体中。同时，可以在载体中加入选择标记基因或荧光蛋白基因，以便于筛选和鉴定敲除细胞。

四、细胞转染

选择合适的细胞系

根据研究目的选择合适的细胞系，例如，常用的细胞系有 HEK293、Hela、MCF-7 等。考虑细胞的生长特性、转染效率以及对特定基因敲除的敏感性等因素。

转染方法

常用的转染方法有脂质体转染、电穿孔转染、病毒载体转染等。选择转染方法时需要考虑细胞类型、转染效率、对细胞的毒性等因素。

脂质体转染：操作简单，适用于大多数细胞系，但转染效率相对较低。

电穿孔转染：效率较高，但对细胞的损伤较大，需要优化转染条件。

病毒载体转染：适用于难以转染的细胞系，但需要构建病毒载体，操作较为复杂。