生物分离介质在分离纯化中可除脂多糖

一、内毒素概念

内毒素，是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，叫做脂多糖。脂多糖对宿主是有毒性的。内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。其毒性成分主要为类脂质A。内毒素位于细胞壁的较外层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各种细菌的内毒素的毒性作用较弱，大致相同，可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。内毒素可以用鲎试剂检测。

二、内毒素的去除

被污染的产品去除内毒素即使在生产中采取了**的工艺和严格的预防措施,原液仍有可能被污染,如何处理已被污染的原液是比较棘手的问题。因为原液中通常已加入保护剂,重新纯化是非常困难的。如果原液及保护剂的分子量与内毒素分子量差别较大,那么选用适当的的超滤膜,通过超滤来去除内毒素是可能的,但由于膜吸附过程中产热及系统残留等原因,活性损失较大。

生物制品在生产过程中去除内毒素也是纯化环节中重要一环节。生物制品的纯化,主要是采用各种柱层析技术,如疏水层析、离子交换、亲和层析、分子筛等,这些技术纯化目标产品的同时也可以**去除内毒素。

三、各类层析介质去除内毒素原理和情况

1.分子筛：分子筛是利用凝胶的网状结构根据分子大小进行分离的一种方法。一般重组产品分子量为几万道尔顿,而内毒素分子量为几十万至上百万道尔顿,常是多聚体,因此利用分子筛可以**去除内毒素,但其处理量小,处理时间较长。

2.疏水层析：内毒素的脂肪A部份有很强的疏水性,但在高盐下会凝集,无法挂上疏水层析柱。可选择能结合目标蛋白的疏水介质而去除内毒素。

3.离子交换：离子交换法是通过带电的溶质分子与离子交换剂中可交换的离子进行交换而达到分离纯化的方法。内毒素在pH>2时带负电荷,与阴离子交换介质Q Bio-sep FF或DEAE Bio-sep FF有较强结合,可在洗脱目标蛋白后用高盐缓冲液或NaOH去除,这是离子交换法去除内毒素的基础。Pharmacia公司已开发利用离子交换层析法从白蛋白中去除内毒素的工艺,主要采用DEAE Sepharose Fast Flow介质,将被内毒素污染的白蛋白上柱,白蛋白和大部分内毒素结合于介质上,先清洗掉不结合的内毒素,然后选择性洗脱白蛋白。

.亲合层析：亲合层析技术,特别是免疫吸附剂在生产中的运用使得生物大分子的纯化变得简单。免疫吸附的原理基于抗原、抗体的特异性作用,以目标蛋白作为抗原,将通过杂交瘤技术生产的单克隆抗体偶联于介质上,以此介质来吸附目标蛋白。由于相互作用的高度特异性,理论上仅有目标蛋白吸附于介质上,内毒素全部穿透,洗脱后将得到纯度很高的无热原产品。实际上,由于介质本身存在的非特异性吸附,仍有少量的杂蛋白和内毒素同时被吸附,但内毒素含量是**的。在干扰素(IFN)生产中,洗脱物内毒素含量一般为0.25EUmL-1。

目前较为**的处理方法是采用亲和层析技术将毒素底物LAL或多粘菌素B(PMB)偶联于CNBr activated Bio-sep FF或NHS-activated Bio-sep FF上,以此介质特异性吸附内毒素,而让蛋白通过。

产品供应：

弱阴离子交换介质(DEAE)    

弱阳离子交换介质(CM)    

强阴离子交换介质(Q)    

强阳离子交换介质(SP)    

琼脂糖亲和介质(肝素)    

琼脂糖亲和介质(谷胱甘肽)    

琼脂糖亲和介质(Ni)    

琼脂糖亲和介质(蓝胶)    

琼脂糖亲和介质(Protein A)    

疏水层析介质(苯基琼脂糖)    

疏水层析介质(丁基琼脂糖)    

疏水层析介质(丁基硫琼脂糖)    

环氧活化琼脂糖凝胶介质    

PST介质(30微米, 疏水)    

PHEMA介质(30微米, 亲水)    

镍离子琼脂糖凝胶4FF/6FF    

镍离子琼脂糖凝胶4FF/6FF    

镍离子琼脂糖凝胶4FF/6FF    

耐碱Protein A 琼脂糖凝胶4FF    

耐碱Protein A 琼脂糖凝胶4FF    

耐碱Protein A 琼脂糖凝胶4FF    

耐碱Protein A 琼脂糖凝胶4FF    

Protein A 琼脂糖凝胶4FF    

Protein A 琼脂糖凝胶4FF    

Protein A 琼脂糖凝胶4FF    

Protein A 琼脂糖凝胶4B    

Protein A 琼脂糖凝胶4B    

Protein A 琼脂糖凝胶4B    

Protein G 琼脂糖凝胶4FF    

Protein G 琼脂糖凝胶4FF    

Protein G 琼脂糖凝胶4FF    

Protein G 琼脂糖凝胶4B    

Protein G 琼脂糖凝胶4B    

Protein G 琼脂糖凝胶4B    

DEAE高流速琼脂糖微球（DEAE Bio-sep FF）    

Q高流速琼脂糖微球（Q Bio-sep FF ）    

CM高流速琼脂糖微球（CM Bio-sep FF）    

SP高流速琼脂糖微球（SP Bio-sep FF）    

4B琼脂糖微球（Bio-sep 4B）    

6B琼脂糖微球（Bio-sep 6B）    

交联4B琼脂糖微球（Bio-sep CL4B）    

交联6B琼脂糖微球（Bio-sep CL6B）    

高流速4FF琼脂糖微球（Bio-sep 4FF）    

高流速6FF琼脂糖微球（Bio-sep 6FF）    

高浓度琼脂糖微球    

苯基高流速琼脂糖微球（Phenyl Bio-sep FF）    

丁基4B琼脂糖微球（Butyl Bio-sep 4B）    

高流速丁基琼脂糖微球（Butyl Bio-Sep 4FF）    

螯合高流速琼脂糖微球（Chelating Bio-sep FF）(IDA)    

螯合高流速琼脂糖微球（Chelating Bio-sep FF）(NTA)    

溴化氰高流速4FF琼脂糖微球（CNBr Bio-sep 4FF）    

氨己基4B琼脂糖微球（EAH Bio-sep 4B）    

羧戊基4B琼脂糖微球（ECH Bio-sep 4B）    

环氧活化高流速琼脂糖微球（Epoxy-activated Bio-sep FF）    

去内毒素琼脂糖微球6B/6FF（Endotoxin Removal Bio-sep 6B/6FF）    

肝素高流速琼脂糖微球（Heparin Bio-sep 6FF）    

蓝色高流速琼脂糖微球（Blue Bio-sep 6FF）    

明胶琼脂糖微球 4B/4FF（Gelatin Bio-sep 4B/4FF）    

赖氨酸琼脂糖微球4B（Lysine Bio-sep 4B）    

硼酸高流速琼脂糖微球    

Protein A 高流速4B琼脂糖微球    

ConA 高流速4B琼脂糖微球    

上述产品齐岳生物均可供应，仅用于科研！

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