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花菁类染料Cy3标记重组蛋白/链霉亲和素/转铁蛋白/叠氮
发布时间:2025-04-09    &nbsp作者:wyh  &nbsp分享到:

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产品名称:花菁类染料Cy3标记重组蛋白/链霉亲和素/转铁蛋白/叠氮

标记策略与关键步骤

1. 重组蛋白标记

方法:

NHS酯法:Cy3-NHS酯与蛋白表面氨基反应。

马来酰亚胺法:通过硫醇基团(如巯基化蛋白)偶联Cy3-马来酰亚胺。

示例:

标记条件:pH 7.4-8.5,室温反应1-2小时。

纯化:透析(MWCO 3.5 kDa)或凝胶过滤色谱。

2. 链霉亲和素标记

方法:

NHS酯法:Cy3-NHS酯与链霉亲和素的赖氨酸残基反应。

应用:

生物素-链霉亲和素系统:用于检测生物素化抗体或核酸探针。

优势:

每个链霉亲和素可结合4个Cy3分子,信号放大效应显著。

3. 转铁蛋白标记

方法:

NHS酯法:Cy3-NHS酯与转铁蛋白的表面氨基反应。

应用:

细胞摄取研究:通过转铁蛋白受体(TfR)介导的内吞作用,追踪细胞摄取过程。

优化:

标记比例:1:50(Cy3:转铁蛋白,摩尔比),避免过度标记导致功能丧失。

4. 叠氮化合物标记

方法:

点击化学:Cy3-炔烃与叠氮基团通过铜催化点击反应(CuAAC)偶联。

应用:

代谢标记:叠氮化代谢物(如叠氮丙糖)被细胞摄取后,通过点击反应引入Cy3荧光。

优势:

高选择性,背景信号低。

温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

花菁类染料Cy3标记重组蛋白/链霉亲和素/转铁蛋白/叠氮

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