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利用淀粉芽孢杆菌为原料的绿色合成方法来制备AgNPs纳米银颗粒
发布时间:2021-03-18     作者:zzj   分享到:

金属纳米颗粒在医学上有多种应用,涉及细菌、真菌和生物分子合成金属纳米颗粒的方法被认为是温和、简单和环保的,由于易于操作和具有遗传修饰特性,细菌有望成为合成AgNPs的候选,然而,大多数细菌合成方法反应速度缓慢或者不适合大规模培养,因此,非致病菌更适合AgNP的合成,此外,太阳辐射能够**的合成金纳米粒子且减少能源成本。

一种用太阳照射法从芽孢杆菌淀粉酶和AgNO3的细胞提取物中制备了银纳米颗粒的方法,光强度、芽孢杆菌提取物浓度和NaCl添加量会影响AgNPs的合成。在较佳条件下(太阳能强度为70000 lx,提取物浓度为3 mg/mL,NaCl含量为2 mM),在80分钟内将98.23±0.06%的Ag+(1 mM)还原为AgNPs,并且达到了AgNPs的电势为70.84±0.66毫伏,TEM(透射电子显微镜)和XRD(X射线衍射)分析证实,合成了平均直径为14.6 nm的圆形和三角形结晶AgNPs。由于热灭活的提取物还介导了AgNPs的形成,因此酶促反应可能不参与AgNPs的形成。AgNPs的较高的绝对电位值,可能是由于与蛋白质相互作用引起的,这可能解释了AgNPs悬浮液的高稳定性。AgNPs在液体和固体培养基中均显示出对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的抗菌活性。

将淀粉芽孢杆菌 LSSE-62(含蛋白胨10)接种于LB培养基中进行培养制备无细胞芽孢杆菌提取物。研究不同反应条件(太阳辐射、无细胞提取物浓度和NaCl添加物)对合成AgNPs的影响。

**用4 mg/mL的无细胞提取物研究了不同太阳强度(30000、40000、50000、70000 lx)对AgNPs合成的影响,将一个样品置于黑暗中作为对照,通过玻璃窗进行阳光照射,通过在样品前放置不同的玻璃片并用TES 133A勒克斯仪测量光线来调节光强;随后在70000 lx太阳强度下研究不同数量的细胞游离提取物(1,2,3,4 mg/mL)的影响,以不含提取物的AgNO3溶液为对照;在含有3 mg/mL提取物的混合物中,以70,000 lx的光强度测定NaCl的影响,NaCl浓度为0.5、1、2和3 mM。使用紫外可见分光光度计扫描反应混合物的紫外可见光谱来测定AgNPs的产量;用贝克曼库尔特德尔萨纳诺分析仪进行电位分析;用带能量色散光谱系统的JEM-2010透射电子显微镜对AgNPs进行表征,计算颗粒粒径分布;用Bruker Vecter 22 FTIR对AgNPs进行傅立叶变换红外光谱分析;用扩散法测定固体LB培养基中的抗菌活性。

在含有4 mg/mL无细胞芽孢杆菌提取物并暴露于阳光下1分钟的情况下,观察到反应混合物的颜色从浅棕色变为黄色,并在100分钟后,溶液变为橙红色,可见区光谱的吸光度增加,在暗箱中孵育的样品没有观察到这种变化(图1a),颜色的变化是由于AgNPs在可见区域的表面等离子体共振,在不同光强下孵育,在423 nm左右得到了相同的主峰,这表明AgNPs的颗粒大小和形状相似。胶体稳定性的理论**是电位的绝对值为30 mV,而超过50 mV的绝对值则表明分散度是高稳定的,在30,000 lx和40,000 lx时产生的AgNPs的绝对电位值分别为54.52±1.44 mV和71.70±1.96 mV,但在较高光强时产生的AgNPs的值无统计学差异(图1b)。图2显示了在存在不同数量的无细胞提取物的情况下AgNPs的可见吸光度和,峰吸收强度随细胞提取物浓度的增加而增加,在3 mg / mL提取液中获得较大吸收强度。在通过真菌细胞提取物合成AgNPs的过程中,蛋白质参与了AgNPs的还原和稳定化,并通过与蛋白封盖实现AgNPs的稳定。添加NaCl,在反应结束时,几乎检测不到残留的Ag+,并且98.23±0.06%的Ag+被还原为AgNPs。合成的AgNPs的XRD光谱与粉末衍射标准联合委员会的纯结晶银结构数据库匹配,作者的研究表明,当采用其他细菌和真菌合成的AgNPs也为纳米晶体形式。在液体培养中,试验细菌枯草杆菌和大肠杆菌的生长受到AgNPs浓度依赖性的**。

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由于热变性的无细胞提取物在太阳辐射下能**地介导AgNPs的形成(图3a),可见光和紫外光也可以介导AgNPs的合成,在细胞提取物存在的情况下,光驱动AgNPs合成的确切机制尚不清楚,但已证实含有羧酸的肽的参与,红外光谱分析(图3b)显示,在1655和1543 cm-1处的条带可以被认为是酰胺的羰基伸缩和酰胺的-N-H伸缩振动,1456 cm-1处的峰是由于氨基酸残基羧基上COO-的对称拉伸。AgNPs显示了与无细胞提取物相同的特征带,表明银纳米晶体被蛋白质包裹,对于用真菌提取物生产的AgNPs,被报道了相似的结果,由带负电的蛋白质封端导致的AgNPs的高负电位性质可能是使AgNPs稳定的原因。

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