敲除单克隆细胞株的构建，技术服务，齐岳生物供应

敲除单克隆细胞株的构建是一种重要的实验技术，在基因功能研究、疾病模型建立以及药物研发等领域具有广泛的应用。

首先，构建敲除单克隆细胞株需要选择合适的基因敲除技术。目前常用的方法有基于同源重组的基因敲除、基于 CRISPR/Cas9 系统的基因编辑以及 RNA 干扰等技术。其中，CRISPR/Cas9 系统因其高效、简便、特异性强等优点，成为构建敲除单克隆细胞株的首选方法。

在确定基因敲除技术后，需要设计并合成针对目标基因的向导 RNA（gRNA）。gRNA 的设计要考虑到目标基因的序列特点、敲除效率以及潜在的脱靶效应等因素。然后，将 gRNA 和 Cas9 蛋白或表达 Cas9 的载体导入细胞中，通过 Cas9 蛋白对目标基因的切割作用，引发细胞内的 DNA 修复机制，从而实现基因敲除。

为了获得敲除单克隆细胞株，需要对经过基因敲除处理的细胞进行筛选和克隆。常用的筛选方法包括药物筛选、筛选等。例如，可以利用含有抗性基因的载体进行转染，然后在含有相应药物的培养基中进行筛选，存活下来的细胞即为可能的敲除细胞。接着，通过有限稀释法或流式细胞术等方法将筛选得到的细胞进行克隆，获得单个细胞来源的细胞株。

对构建好的敲除单克隆细胞株需要进行验证和鉴定。可以通过 PCR、Western blot、测序等方法检测目标基因的敲除情况，同时还可以观察细胞的表型变化，以确定基因敲除的效果。此外，还需要对敲除单克隆细胞株的稳定性进行检测，确保在长期培养过程中基因敲除状态不会发生改变。

产品：

慢病毒V5荧光素酶表达载体

ERα基因shRNAi慢病毒载体的构建

重组慢病毒载体建立稳定表达绿色荧光蛋白

绿色荧光蛋白和胸苷激酶基因共表达的慢病毒载体的构建

含绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体的构建

慢病毒载体介导成纤维细胞高效稳定表达绿色荧光蛋白

慢病毒介导的shRNA靶向干扰基因表达

大鼠基因RNA干扰慢病毒载体的构建

靶向PRL-3基因的shRNA慢病毒载体的构建

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。