利用CRISPR-Cas9技术构建微小核糖核酸-551b基因敲除小鼠模型,基因敲除定制服务
齐岳生物提供专业基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求,结合靶基因的情况,设计不同的基因敲除方案。例如,移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。
随着CRISPR/Cas9等基因编辑技术的兴起,基因敲除的研究越来越受到关注。相比shRNA技术,CRISPR/Cas9可以实现更为彻底的基因失活。然而,shRNA仍然因其操作简单、成本较低和适用性广等优势,在特定研究场景下保持其价值。例如,在一些需要部分抑制基因表达而非完全敲除的场合,shRNA则显示出独特的适用性。
微小核糖核酸(microRNA,miRNA)在基因表达调控中发挥着重要作用。miR - 551b 作为其中的一员,其功能的深入研究对于理解生命过程和疾病机制具有重要意义。利用 CRISPR - Cas9 技术构建 miR - 551b 基因敲除小鼠模型,为研究 miR - 551b 的功能提供了有力的工具。
首先,需要设计针对 miR - 551b 基因的 sgRNA(single - guide RNA)。通过对 miR - 551b 基因序列的深入分析,选择合适的位点来设计 sgRNA,以确保其能够准确地引导 Cas9 蛋白对目标基因进行切割。这些位点通常位于 miR - 551b 基因的关键区域,如编码区或调控区。
接下来,将设计好的 sgRNA 与 Cas9 蛋白的表达载体构建在一起。这个载体将被用于导入小鼠的生殖细胞或胚胎干细胞中。可以通过显微注射等方法将载体导入小鼠的受精卵中,或者通过基因编辑技术在胚胎干细胞中进行基因敲除,然后将编辑后的胚胎干细胞注入到小鼠囊胚中。
在小鼠细胞内,Cas9 蛋白在 sgRNA 的引导下,对 miR - 551b 基因进行切割,导致 DNA 双链断裂。细胞自身的修复机制会对断裂的 DNA 进行修复,可能会导致基因的插入、缺失或突变,从而实现 miR - 551b 基因的敲除。
为了筛选出成功敲除 miR - 551b 基因的小鼠,需要进行一系列的检测和鉴定。可以通过 PCR 扩增 miR - 551b 基因区域,并进行测序分析,以确定基因是否发生了突变。同时,还可以通过实时定量 PCR(qRT - PCR)等方法检测 miR - 551b 的表达水平,来验证基因敲除的效果。
构建成功的 miR - 551b 基因敲除小鼠模型可以用于多种研究。例如,可以观察小鼠在生长发育、生理功能、疾病易感性等方面的变化,以揭示 miR - 551b 在这些过程中的作用。此外,还可以通过对不同组织和细胞类型中基因表达的分析,深入了解 miR - 551b 对下游靶基因的调控机制。
利用 CRISPR - Cas9 技术构建 miR - 551b 基因敲除小鼠模型,不仅为 miR - 551b 功能的研究提供了新的途径,也为进一步理解 miRNA 在生命活动中的作用提供了重要的模型。同时,该模型还可能为相关疾病的研究和治疗提供新的靶点和策略。
西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括:
(1)过表达质粒构建;
(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)
(3)构建基因截短体质粒;
(4)亚克隆质粒构建;
(5)通过慢病毒介导的基因过表达;
(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减
(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除
注意事项:
本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。
使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。
请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。