Crispr/Cas9技术在CHO细胞中基因敲除，基因敲除技术服务

中国仓鼠卵巢（Chinese Hamster Ovary，CHO）细胞是生物制药领域中广泛应用的细胞系，用于生产各种重组蛋白药物。Crispr/Cas9 技术在 CHO 细胞中的基因敲除为优化细胞性能和提高药物生产效率提供了新的策略。

首先，需要确定要敲除的目标基因。这些目标基因可能与细胞的生长、代谢、产物质量或稳定性等方面相关。例如，某些基因可能影响细胞的凋亡过程，敲除这些基因可能有助于提高细胞的存活率和生产能力；或者某些基因可能参与细胞内的糖基化修饰过程，敲除它们可以改变重组蛋白的糖基化模式，提高药物的疗效和安全性。

设计针对目标基因的 sgRNA（single - guide RNA）是基因敲除的关键步骤之一。通过对目标基因序列的分析，选择合适的位点设计 sgRNA，以确保其能够有效地引导 Cas9 蛋白对目标基因进行切割。同时，需要对 sgRNA 的特异性进行评估，以避免脱靶效应的发生。

接下来，将 sgRNA 和 Cas9 蛋白导入 CHO 细胞中。这可以通过多种方法实现，如脂质体转染、电穿孔或病毒载体介导的感染等。一旦进入细胞，Cas9 蛋白在 sgRNA 的引导下，对目标基因进行切割，造成 DNA 双链断裂。

细胞会通过自身的修复机制对断裂的 DNA 进行修复。非同源末端连接（NHEJ）修复机制通常会导致基因的插入或缺失，从而破坏基因的功能，实现基因敲除。为了筛选出成功敲除目标基因的细胞，通常需要使用一些筛选标记或方法。例如，可以将与目标基因敲除同时发生的抗性基因整合到细胞基因组中，然后通过在含有相应抗生素的培养基中培养细胞，筛选出阳性克隆。

对筛选得到的基因敲除细胞进行进一步的鉴定和分析。可以通过 PCR 扩增和测序等方法确认目标基因是否发生了突变；还可以通过检测细胞的表型变化，如生长速率、代谢产物水平、重组蛋白表达量和质量等，来评估基因敲除对细胞性能的影响。

Crispr/Cas9 技术在 CHO 细胞中基因敲除的应用具有重要意义。通过敲除特定基因，可以优化细胞的生长和代谢特性，提高重组蛋白的产量和质量。此外，还可以利用基因敲除技术研究细胞内各种基因的功能和相互作用，为进一步改进细胞培养工艺和药物生产策略提供理论依据。

齐岳生物提供专业基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求，结合靶基因的情况，设计不同的基因敲除方案。例如，移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。

基因敲除是指使生物体基因组中的特定基因失活或失效的过程。通常是通过在靶基因中引入突变来实现的，使其失去功能。进行基因敲除的方法，包括同源重组、RNA干扰（RNAi）和CRISPR/Cas9。同源重组即通过引入修饰的DNA片段，用无功能或被破坏的版本替换靶基因；RNAi利用小RNA分子来沉默或降解靶基因的信使RNA（mRNA），阻止其翻译为蛋白质；CRISPR/Cas9是一种基因编辑工具，它使用引导RNA（sgRNA）和Cas9酶在基因组的特定位置引入靶向DNA断裂，导致基因破坏。

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注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。