CRISPR/Cas9系统实现基因敲除绝大部分外显子，定制服务

CRISPR/Cas9 系统作为一种强大的基因编辑工具，在实现基因敲除绝大部分外显子方面具有显著优势。

CRISPR/Cas9 系统通过设计多个向导 RNA（sgRNA），可以同时靶向目标基因的多个外显子区域。Cas9 蛋白在 sgRNA 的引导下，对特定的 DNA 序列进行切割，引发细胞的 DNA 修复机制。当细胞通过非同源末端连接（NHEJ）进行修复时，往往会引入插入或缺失突变，从而破坏外显子的编码序列，实现基因敲除。

对于敲除绝大部分外显子，该系统可以更彻底地破坏目标基因的功能。这在研究基因的功能和疾病机制方面具有重要意义。例如，某些疾病可能与特定基因的多个外显子突变相关，通过敲除这些外显子，可以模拟疾病状态，深入研究疾病的发生发展过程。

在实际操作中，需要精确设计 sgRNA 的序列和位置，以确保对目标外显子的高效敲除。同时，要对编辑后的细胞进行严格的筛选和鉴定，确认基因敲除的效果。此外，还需要考虑脱靶效应等潜在问题，通过优化实验条件和进行脱靶检测，提高基因编辑的准确性和特异性。

总之，CRISPR/Cas9 系统为实现基因敲除绝大部分外显子提供了一种高效、精准的方法，为基因功能研究和疾病治疗提供了有力的工具。

齐岳生物可为您提供长期敲低目的基因的需求定制构建shRNA敲低细胞稳转株。我们基于shRNA分值测试三个候选的shRNA，然后将敲低效率的一个通过慢病毒转导生产细胞稳转株。我们通过RT-PCR验证细胞中的基因敲低水平。此外，我们还会进行一系列标准的QC检测，如无菌检测、支原体检测，然后才会放行细胞产品。

技术详情

短发夹RNA（Short hairpin RNA，shRNA）是具有茎环结构的RNA分子，可用于通过互补碱基配对靶向mRNA序列并促使其降解，因此广泛用于各种RNAi应用。通常可以使用双链DNA载体以病毒和非病毒形式将shRNA引入靶细胞。当用shRNA载体转染或转导细胞时，shRNA在细胞核中转录形成发夹结构。shRNA发夹结构包含一个茎环，一条RNA反义链和与其互补的正义链。转录形成的shRNA离开细胞核，在细胞质中经过Dicer加工，然后加载到RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex，RISC）复合体上，随后目标mRNA被识别并降解（图1）。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。